® IF555-aglutinin pšeničnih kalčkov (WGA, rdeča luč)

 

Ime izdelka	mačka št.	spec.
iF555-aglutinin pšeničnih kalčkov (WGA, rdeča luč)	G1731	100UL

 

 

Aglutinin pšeničnih kalčkov (WGA) je lektin, ki se veže na N-acetil-D-glukozamin in sialno kislino ter je eden najbolj raziskanih in pogosto uporabljanih razredov lektinov. Trenutno je najbolj raziskan in pogosto uporabljan razred lektinov. WGA se veže na glikokonjugate, njegovi derivati ​​in konjugati pa se pogosto uporabljajo za označevanje celičnih membran in fibrotičnih brazgotin za fluorescenčno slikanje in analizo. Specifičnost vezave ogljikovih hidratov WGA je usmerjena v zaporedje -1,4-ostankov, povezanih z GlcNAc, znano kot hitinski dekstrini. Vsak monosaharid vsebuje dve identični vezavni mesti, ki nista v interakciji in sta komplementarni trem ali štirim -1,4-enotam GlcNAc. Od testiranih monosaharidov se samo GlcNAc veže na WGA, ManNAc ne, GalNAc pa se veže le šibko. WGA se z visoko afiniteto veže na notranje ostanke GlcNAc v velikih oligosaharidah, ki vsebujejo Gal (1-4)GlcNAc (1-3) (tj. glikani tipa poli(aminolaktoze)) ponovi.N-acetilnevraminska kislina sodeluje le pri nizkoafinitetni interakciji WGA. WGA prikazuje zapleten vzorec glikanske specifičnosti, ki se lahko uporablja za strukturno analizo kompleksnih ogljikovih hidratov. Pripomba iFluor®555 za WGA je verjetno najsvetlejša pripona WGA. Kaže svetlo in rdečo fluorescenco barvila iFluor®555. Pritrditev iFluor®555 WGA se veže na ostanke sialne kisline in N-acetilglukozaminila, tako kot spojnik AF555 WGA.

 

Aglutinin pšeničnih kalčkov (WGA) je 36 kDa lektin, ki se običajno uporablja za označevanje celic sesalcev, celičnih membran po Gramu pozitivnih bakterij in kvasovk, kot tudi skeletnih in srčnih sakralnih membran, med drugim zaradi njegove lastnosti spajanja na N-acetil - -D-glukozaminilni ostanki in N-acetil- -D-glukozaminil oligomeri v celičnih membranah. Ko se WGA uporablja za barvanje kardiomiocitov, je mogoče obarvati celične membrane kardiomiocitov, tako da je mogoče iz primerjave slike z normalno skupino videti, ali so hipertrofične ali ne, prav tako pa lahko premer in površino obarvanih celic. meriti s specializirano programsko opremo, ki omogoča analizo, ali so kardiomiociti hipertrofični ali ne.

 

 

Ladja z mokrim ledom; Shranjujte pri -20 stopinjah 12 mesecev.

 

 

Komponenta	G1722-50UL
iF555-aglutinin pšeničnih kalčkov (WGA, rdeča luč)	100 μL
Priročnik	1 kos

 

 

1. Pripravite svoje1×PBS pufer(pH 7.2-7.4, priporočenoG4202), fiksativ, ki vsebuje 3.0-4.0% formaldehida (priporočenoG1101, ki vsebuje 4 % PFA),tesnilo proti fluorescenci(priporočeno G1401), inraztopina za barvanje DAPI, pripravljena za uporabo(priporočenoG1012).

2. Ko izdelek uporabite prvič, popolnoma stopljeni izdelek centrifugirajte pri nizki hitrosti 1 minuto, da preprečite izgubo tekoče stene cevi. Priporočljivo je, da izdelek odmerite glede na količino, uporabljeno v posameznem poskusu, da preprečite izgubo topila zaradi izhlapevanja. Hraniti pri -20 stopinjah stran od svetlobe.

3. Pred formalnimi poskusi aspirirajte 5 μL iF555-aglutinina pšeničnih kalčkov (WGA, rdeča luč) in zmešajte z 1 ml PBS, da dobiteiF555- Delovna rešitev WGA. Učinek obarvanja je lahko različen za različne tipe celic. Za optimalno delovno koncentracijo obarvanja si oglejte literaturo ali izvedite predtest, da ugotovite.iF555- Delovna rešitev WGAje pripravljen za uporabo, shranjen na sobni temperaturi in zaščiten pred svetlobo ter porabljen še isti dan.

 

 

Barvanje živih celic (12-plošča z vdolbinicami kot primer)

1. Celice 2-krat sperite z 1 × PBS pufrom.

2. Dodajte 100 μL delovne raztopine iF555-WGA v vsako jamico celic in inkubirajte 10-30 min pri 37 stopinjah, zaščiteno pred svetlobo. Pazite na tesnjenje, da preprečite izhlapevanje tekočine. Odstranite inkubacijsko raztopino in sperite s pufersko raztopino 2-3-krat po 3-5 min.

3. Po končani inkubaciji smo celice trikrat sprali z 1 × PBS pufrom, vsakič 5 minut.

4. Rezultati so bili opazovani s fluorescenčno mikroskopijo ali lasersko konfokalno mikroskopijo.

 

Fiksno obarvanje celic (6-pajek celic vdolbinic kot primer)

1. Kulturne celice smo plazili (pri gostoti vsaj 50 % konfluence), gojišče smo odstranili in celice dvakrat sprali z 1 × PBS pufrom, predhodno ogretim na 37 stopinj.

2. Dodajte ustrezno količino fiksativa, da prekrijete celice, in fiksirajte 10-30 min pri sobni temperaturi.

3. Fiksativ smo aspirirali in celice sprali z 1 × PBS pufrom pri sobni temperaturi 2-3-krat po 10 minut.

4. Potem ko celico pajek rahlo stresete do suhega, s histokemičnim peresom narišite krog tako, da so bile celice v središču kroga. Vzemite 100 μl delovne raztopine iF555-WGA, da popolnoma prekrijete celice, in inkubirajte pri 37 stopinjah 30 minut stran od svetlobe. Pazite, da stekelca zaprete in preprečite izhlapevanje tekočine, da se posuši.

5. Po končani inkubaciji smo celice trikrat sprali z 1 × PBS pufrom 5 minut vsakič.

6. (Izbirno) Kapljice pripravljene raztopine za barvanje DAPI smo dodali stekelcem za pajkanje, da smo pokrili celice, in jedrsko obarvanje izvajali 8 minut. Celice smo sprali z 1× PBS pufrom 2-3-krat za Vsakič 30 s-1 min.

7. Celične celice so bile rahlo stresane do suhega in obrnjene na objektno stekelce s kapljico tesnilnega sredstva za dušenje fluorescence, odvečno tesnilno sredstvo pa smo pobrisali s papirnato brisačo.

[Opomba]6. in 7. korak lahko nadomestite z lepilom proti fluorescenčnemu dušenju, ki vsebuje DAPI (priporočilo G1407), ki hkrati obarva jedra in zatesni film.

8. Rezultate smo opazovali s fluorescenčno mikroskopijo ali lasersko konfokalno mikroskopijo z izbranimi kanali 555 (Ex/Em=556/574 nm) in DAPI (Ex/Em=364/454 nm).

 

Barvanje delov tkiva

1. Predobdelava rezanja tkiva:

Zamrznjene dele (odseke zamrznjenega svežega tkiva ali odseke zamrznjenega fiksiranega tkiva) smo nekaj minut pustili stati pri sobni temperaturi in jih vrnili na sobno temperaturo; sekcije so bile potopljene v fiksativ za 10-15 min pri sobni temperaturi, odstranjene in naravno posušene ter nato navlažene in sprane v prečiščeni vodi ali 1 × PBS pufru, da se odstrani preostali fiksativ na tkivu.

Parafinski odseki so bili razvoskani in rehidrirani;

Tkivne dele (parafinske dele ali zamrznjene dele fiksiranih tkiv) smo dali v popravljalno kaseto, napolnjeno s pufrom za popravilo antigena EDTA (pH 8.0) v mikrovalovno pečico za popravilo antigena. Srednji ogenj za 8 minut ustavite ogenj za 8 minut do srednje nizkega ognja za 7 minut, ta postopek mora preprečiti prekomerno izhlapevanje pufra, stekelca ne sušite. Po naravnem ohlajanju smo stekelca dali v 1 × PBS pufer in 3-krat sprali s stresanjem na stresalniku za razbarvanje, vsakič 5 minut.

2. Barvanje: Ko se del tkiva rahlo posuši, s histokemičnim peresom narišite krog okoli tkiva. Dodajte 50-100 μL delovne raztopine iF555-WGA v krog, da prekrijete tkivo, in 30 minut inkubirajte pri 37 stopinjah stran od svetlobe. Poskrbite za tesnjenje, da preprečite izhlapevanje tekočine in izsušitev stekelcev.

3. Pranje: Po končani inkubaciji smo vzorce trikrat sprali z 1 × PBS pufrom po 5 minut.

4. Barvanje jedra (neobvezno): vzorcu po kapljicah dodajte za uporabo pripravljeno raztopino za barvanje DAPI, da prekrijete celice, in izvajajte barvanje jedra 8 minut. Vzorec sperite z 1×PBS pufrom 2-3-krat 30-krat. s-1 min vsakič.

5. Zapiranje: Ko se sekcije rahlo stresejo do suhega, vzorcu dodajte kapljico tesnilnega sredstva proti fluorescenci in ga zaprite z ustreznim pokrovnim stekelcem.

[Opomba]4. in 5. korak lahko nadomestite z lepilom proti fluorescenčnemu dušenju, ki vsebuje DAPI (priporočilo G1407), ki hkrati obarva jedro in zatesni film.

6. Mikroskopija: Fluorescenčna mikroskopija ali laserska konfokalna mikroskopija za opazovanje rezultatov z izbiro kanalov 488 (Ex/Em=556/574 nm) in DAPI (Ex/Em=364/454 nm).

 

 

1. Vzorci, ki so bili fiksirani dalj časa (npr. parafinski rezi), morajo biti podvrženi postopku popravila s pirolizo, sicer bodo pozitivni rezultati šibki ali skoraj nič.

2. Barvanje WGA za analizo miokarda zahteva visoko stopnjo miokardnega tkiva, ki mora biti popolno in homogeno, zato je najbolje zagotoviti vzorce parafinskih rezov.

3. Pri celičnih vzorcih se pred barvanjem izogibajte uporabi raztopin za permeabilizacijo, saj lahko to povzroči obarvanje strukturnih komponent citoplazme.

4. Fluorescentna barvila so predmet gašenja, zato je priporočljivo, da se testiranje in opazovanje fotografij zaključi čim prej po obarvanju.

5. Med delovanjem nosite laboratorijski plašč in rokavice.

 

Samo za raziskovalno uporabo!

 

 

Priljubljena oznake: ® if555-aglutinin pšeničnih kalčkov (wga,rdeča luč), Kitajska ® if555-aglutinin pšeničnih kalčkov (wga,rdeča luč) proizvajalci, dobavitelji, tovarna