Predstavitev izdelka
|
Ime izdelka |
mačka št. |
spec. |
|
Alkalna fosfataza (termosenzitivna) |
G3400-1000U |
1000 U |
Predstavitev izdelka
|
Opis izdelka: |
Alkalna fosfataza Servicebio® (termosenzitivna) katalizira sproščanje 5'- in 3'- fosfatnih skupin iz DNA, RNA, dNTP in rNTP. Ta encim tudi odstrani fosfatne skupine iz beljakovin. |
|
Aplikacije: |
l Defosforilacija DNA klonirnega vektorja za preprečitev recirkularizacije med ligacijo. l Čiščenje produkta PCR: razgradnja nukleotidov pred sekvenciranjem produkta PCR. l Defosforilacija 5'-koncev nukleinske kisline pred označevanjem s T4 polinukleotidno kinazo. |
|
Vir: |
E.coli s kloniranim bakterijskim genom AP tvori AntarcticBacteriumTAB5. |
|
Čistost: |
Večji ali enak 95 % po SDS-PAGE |
|
Molekulska teža |
~35 kDa |
|
Koncentracija: |
5 U/μL |
|
Opredelitev enote dejavnosti: |
Ena enota je količina encima, ki je potrebna za katalizacijo defosforilacije 1 µg linearizirane pUC19 DNA 5' end v 10 minutah pri 37 stopinjah. Defosforilacija je opredeljena kot več kot 95-odstotna inhibicija religacije linearizirane plazmidne DNA (kot je določeno s transformacijo E. coli). |
|
10 × ALP Reaction Buffer: |
500 mM Bis-Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ZnCl2, pH 6,0. |
|
Pufer za shranjevanje (redčenje): |
10 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, 0,01 mM ZnCl2, 50% glicerol, pH 7,4. |
|
Inaktivacija ali inhibicija |
l Inhibitorji: kelatorji kovin. · l Inaktivira se s segrevanjem pri 80 stopinjah 2 minuti. |
|
Pogoji shranjevanja: |
Shranjujte pri –20 stopinjah do 12 mesecev. |
Vsebina izdelka
|
Številka komponente |
Komponenta |
G3400-1000U |
|
G3400-1 |
Alkalna fosfataza (termosenzitivna) |
200 μL |
|
G3400-2 |
10×ALP Reaction Buffer |
1 ml |
|
Priročnik |
En izvod |
|
Protokol/postopki analize
Ta protokol je primeren za odstranitev 3' in 5'-fosfatnih skupin iz DNA in RNA.
- Zamrznjene reagente odtalite, premešajte in na kratko centrifugirajte.
- Hranite encime na ledu.
- Reakcijski pufer 10 × ALP hranite pri sobni temperaturi.
1. Pripravite naslednjo reakcijsko mešanico, ki vsebuje:
|
Komponenta |
Glasnost |
|
vzorec DNK ali RNK |
1-5 ug |
|
10×ALP Reaction Buffer |
2 μL |
|
Alkalna fosfataza (termosenzitivna) |
1 μL |
|
Voda brez nukleaze |
Do 20 μL |
|
Skupna prostornina |
20 μL |
2. Temeljito premešajte, na kratko zavrtite in inkubirajte pri 37 stopinjah 15-30 minut. Optimalen čas inkubacije in koncentracijo encima je treba določiti eksperimentalno za vsak substrat.
3. Ustavite reakcijo s segrevanjem 2 minuti pri 80 stopinjah.
4. Glede na potrebe nadaljnjih poskusov je mogoče zgornjo defosforilirano DNK ali RNK očistiti na različne načine (kot je komplet za čiščenje DNK, ekstrakcija s fenolnim kloroformom in metoda obarjanja z etanolom).
Opomba
1. Alkalna fosfataza, tako kot večina alkalnih fosfataz, je od Zn2+in Mg2+-odvisen encim. Reakcijski pufer ALP zagotavlja dovolj Zn2+in Mg2+ za zagotavljanje encimske aktivnosti.
1. Alkalno fosfatazo zavirajo kelatorji kovin (npr. EDTA), anorganski fosfat in fosfatni analogi.
1. Aktivnost alkalne fosfataze se zmanjša v prisotnosti reducentov (DTT, -ME).
2. Alkalno fosfatazo je treba med rokovanjem poslati na ledu in jo takoj po uporabi shraniti pri -20 stopinjah.
1. Zaradi vaše varnosti in zdravja nosite zaščitna očala, rokavice ali zaščitno obleko.
Samo za raziskovalno uporabo!
Priljubljena oznake: alkalna fosfataza (termosenzitivna), proizvajalci, dobavitelji, tovarna alkalne fosfataze (termosenzitivna) na Kitajskem
